松材线虫快速检测仪操作指南

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　　一、 检测前准备

　　环境与设备准备

　　野外操作选择阴凉无风处，温度控制在 15–35℃;实验室操作需清洁工作台，避免核酸污染。

　　取出检测仪，开机预热 10 分钟，同时检查电量(续航需≥2 小时)或外接稳定电源。

　　耗材与试剂准备

　　核对耗材：预制扩增试剂卡、样本裂解液、一次性研磨管、移液器、滤芯吸头、无酶离心管。

　　试剂复温：将冷藏的预制试剂卡常温放置 10 分钟，避免温差导致试剂失效;确认裂解液无浑浊、无沉淀。

　　准备对照：每批次需设置阴性对照(健康松木样本)和阳性对照(松材线虫标准 DNA 样本)。

　　二、 样本前处理(5–10 分钟)

　　取样：从疑似病木的病健交界处，剪取 1–2g 木屑或木段，放入一次性研磨管。

　　裂解释放核酸

　　向研磨管中加入 500μL 裂解液，拧紧盖子后剧烈震荡 1 分钟，或用检测仪配套超声模块处理 30 秒。

　　水浴加热：沸水浴 5 分钟(野外可用便携式沸水器)，取出后静置冷却至室温。

　　上清液制备：10000rpm 离心 1 分钟(无离心机可静置 2 分钟取上清)，吸取 100μL 上清液至新的无酶离心管，作为待测样本液。

　　三、 加样与上机检测(10–15 分钟)

　　加样操作

　　撕开预制试剂卡封口膜，用移液器吸取 20μL 待测样本液，缓慢加入试剂卡反应孔中，避免产生气泡。

　　同时向阴性对照、阳性对照的试剂卡中，分别加入 20μL 阴性样本液、阳性标准液。

　　轻弹试剂卡侧壁，确保液体与冻干试剂充分混合，盖上密封盖防止污染。

　　上机设置

　　将试剂卡放入检测仪卡槽，关闭舱门，在触屏界面选择松材线虫检测程序。

　　设置参数：等温扩增温度(LAMP 法 63℃、RPA 法 39℃)，反应时间 20 分钟，点击 “开始检测"。

　　四、 结果判读与数据管理(5 分钟)

　　结果查看

　　反应结束后，检测仪自动生成检测结果：荧光通道法以曲线出现明显指数增长为阳性;层析试纸条法以检测线(T 线)和质控线(C 线)双条带为阳性，仅 C 线为阴性，无条带为检测无效。

　　判读标准：阳性对照需显阳性、阴性对照需显阴性，否则本次检测结果无效。

　　数据保存与上传

　　点击 “保存数据"，记录样本编号、检测时间、采样地点等信息;支持蓝牙 / 4G 上传至林业检疫平台。

　　导出检测报告，打印后存档备案。

　　五、 后续清理与注意事项

　　取出试剂卡，按生物安全要求装入密封袋，带回实验室集中处理，禁止野外丢弃。

　　用 75% 酒精擦拭检测仪卡槽与表面，关闭电源;移液器、研磨管等耗材按医疗废物处理。

　　检测异常样本需重复检测，仍为阳性的需送实验室用荧光定量 PCR 确证。